診斷很大程度上依賴于樣品的質(zhì)量、樣品在進(jìn)行實驗室處理前的儲存和運輸過程的情況。用于細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚接種、直接檢測病毒抗原或核酸的呼吸道病毒的樣品，應(yīng)在流感癥狀出現(xiàn)的開始3天進(jìn)行采集。禽流感主要由呼吸道和消化道感染。因此，哺乳動物及禽類上呼吸道采集的樣品適合用于流感病毒的鑒定和診斷。

    上呼吸道拭子分為鼻棉拭子、喉棉拭子和氣管棉拭子三種。已屠宰或已死亡的哺乳動物應(yīng)在下呼吸道采集樣品，樣品分為氣管棉拭子、支氣管棉拭子、肺組織等三種。禽類樣品采集的部位應(yīng)集中在呼吸道和大部分的消化道，采集的病毒樣品種類包括泄殖腔棉拭子和糞便，其中泄殖腔棉拭子可從活體雞或剖殺的雞群中采集，從雞舍或環(huán)境中采集糞便樣品是常用的采樣方法，但其具有不能準(zhǔn)確確定樣品來源的缺點，如果懷疑死禽體內(nèi)含有高致病力的禽流感病毒，還應(yīng)采集有代表性的內(nèi)臟器官如腦、脾臟、心臟、肺臟、胰腺、肝臟和腎臟以及呼吸道、消化道等部位的樣品。

　　如果想通過對感染細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色的方法直接檢測病毒， 那么采集的病料應(yīng)放在冰浴中，在1~2小時內(nèi)進(jìn)行樣品處理。用于分離病毒的樣品，采完樣后應(yīng)立即將病料放在冰箱中冰凍，并盡可能早地接種于敏感細(xì)胞或雞胚。如果樣品不能在48~72小時內(nèi)處理，應(yīng)冷凍在-70℃或以下。如果裝樣品的試管沒有被密封，或者裝樣品的塑料袋封閉不嚴(yán)，則樣品不能放在干冰中運輸或儲存。因為干冰接觸到病料樣品后，能很快地滅活其中可能存在的流感病毒。

　　采集的樣品應(yīng)放在適宜的運輸緩沖液中才能確保病毒的分離。目前已有一些適用于不同病毒樣品的運輸緩沖液，例如Hanks平衡鹽溶液、細(xì)胞培養(yǎng)液、磷酸鹽緩沖液、胰蛋白胨—磷酸肉湯、犢牛肉湯和蔗糖磷酸緩沖液等，在這些運輸緩沖液中應(yīng)添加0.5%~1%的蛋白質(zhì)，例如牛血清白蛋白、明膠，還應(yīng)添加抗生素以防止細(xì)菌的生長。

　　高致病性禽流感診斷方法和程序是什么?

　　(1)流行病學(xué)：禽流感病毒的宿主廣泛，雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉和雉雞等家禽及野鳥、水禽、海鳥等均可感染。其中以雞和火雞感染禽流感病毒后的危害最為嚴(yán)重，而在鴨中分離到的病毒比其他禽類多。各種日齡的禽均可感染。

　　禽流感病毒主要通過與患禽(包括與患禽接觸的器具)的直接接觸和間接接觸傳染。此外，帶毒的飛鳥或水禽常常成為傳染源，引起家禽大批發(fā)病和死亡。

　　(2)臨床癥狀：禽流感的潛伏期從幾小時到3天不等，潛伏期的長短依賴于感染病毒的毒力和劑量、感染途徑、被感染禽的種別和禽體的狀態(tài)。急性感染的禽流感無特定臨床癥狀，在短時間內(nèi)可見食欲廢絕，體溫驟升，呼吸道癥狀，下痢，后期出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。伴隨大量死亡。

　　(3)病理變化：禽流感的病理變化因感染毒株毒力的強(qiáng)弱、病程長短和禽種的不同而變化不一。主要表現(xiàn)為頭腫，肉髯、冠出血，小腿和趾部皮下出血，腺胃乳頭出血及輸卵管炎等。

　　(4)病原學(xué)診斷：病毒分離需由國家規(guī)定的實驗室完成。

　　(5)血清學(xué)診斷：目前用于禽流感檢測的方法有禽流感病毒分離技術(shù)、瓊脂擴(kuò)散(AGP)試驗、血凝試驗、血凝抑制(HI)試驗、神經(jīng)氨酸酶抑制(NI)試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、病毒中和試驗(SN)、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、免疫熒光技術(shù)(IF)及核酸探針技術(shù)。其中血凝試驗、血凝抑制試驗和瓊脂擴(kuò)散試驗是OIE推薦使用的方法。

　　禽流感病毒血凝素分型抗原和標(biāo)準(zhǔn)分型血清均由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供，按說明書操作。

　　病原的確認(rèn)工作大概需要多長時間?做什么實驗?

　　高致病性禽流感必須通過病毒的分離、鑒定來確診。病毒的分離及亞型鑒定一般至少需要2~3天。病毒的致病性必須通過人工靜脈接種無特定病原雞(SPF雞)來最后確定。

　　如何對禽流感做出鑒別診斷?高致病性禽流感是我國以前所出現(xiàn)過的雞瘟嗎?它們之間應(yīng)如何區(qū)別?

　　由于禽流感感染引起的流行特點、癥狀及病理變化與某些禽的傳染病相似，必須及時做出鑒別診斷，如雞新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、傳染性鼻炎、支原體病、衣原體病、產(chǎn)蛋下降綜合征等;特別是某些疾病的混合感染或繼發(fā)感染，使病情更為復(fù)雜，給診斷帶來困難或容易發(fā)生誤診。因此，類癥鑒別診斷十分重要。根據(jù)流行特點、癥狀、病理剖檢和實驗室檢查(病原學(xué)、血清學(xué))等綜合分析，是可以區(qū)別開的。同樣，繼發(fā)或并發(fā)細(xì)菌病或病毒病時，通過病原分離和某些檢測方法便可確定。

　　最近我國由H5N1亞型禽流感病毒引起的高致病性禽流感不是以前我國所出現(xiàn)過的雞瘟。雞瘟的學(xué)術(shù)名稱叫新城疫，是1926年在英國一個叫新城的地方發(fā)現(xiàn)的一種疾病，故叫新城疫，其發(fā)病率和死亡率也非常高，曾給我國的養(yǎng)雞業(yè)造成過巨大危害，但我國已有很好的疫苗控制新城疫，因此該病除了在農(nóng)村有一些地方還有發(fā)生外，在規(guī)�；�雞場由于正確接種了疫苗，發(fā)病率和死亡率都很低，其危害程度比禽流感輕得多。高致病性禽流感無特定臨床癥狀，表現(xiàn)為突然發(fā)病，在短時間內(nèi)可見食欲廢絕、體溫驟升、精神高度沉郁，雞冠與肉垂水腫、發(fā)紺，伴隨著大批死亡，數(shù)天內(nèi)死亡率可達(dá)90%以上。雞新城疫與禽流感有明顯的區(qū)別，其病原是完全兩種不同的病毒。禽流感病毒是正黏病毒，新城疫病毒是副黏病毒。新城疫病毒感染在早期可見典型臨床癥狀：潛伏期較長，有呼吸道癥狀，下痢，食欲減退，精神委頓，后期出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。在目前養(yǎng)殖條件下，新城疫疫苗免疫雞群很少發(fā)生典型的新城疫，感染雞群一般表現(xiàn)為輕微的呼吸道癥狀、神經(jīng)癥狀和產(chǎn)蛋雞群的產(chǎn)蛋下降，死亡率較低。

　　現(xiàn)在我們國家針對禽流感的檢測水平到底怎么樣?

　　我們國家自己研究的診斷方法既有傳統(tǒng)的血清學(xué)抗體檢測方法，也有現(xiàn)代的分子生物學(xué)抗原檢測方法，這些和世界衛(wèi)生組織的標(biāo)準(zhǔn)是接軌的，并已用于我國禽流感疫病的診斷和病原檢測。生產(chǎn)的禽流感診斷試劑是成熟的，已經(jīng)分發(fā)給各省的動物防疫部門實際應(yīng)用，在加大了對家禽類的監(jiān)測密度的情況下。同時對水禽野鳥，比如說麻雀、野鴨、鷓鴣等進(jìn)行監(jiān)測。